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          PCR實驗室的防污染方法

          2021-02-22 09:08:58

          按照實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序,所有操作符合《實驗室生物安全通用要求》(GB19489-2008)。

          1、嚴格執行各區功能劃分:

          試劑儲存和準備區:貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應混合液的準備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。

          標本制備區:核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管。對于涉及臨床樣本的操作,應符合生物安全二級實驗室防護設備、個人防護和操作規范的要求。

          擴增區:cDNA合成、DNA擴增及檢測。

          擴增產物分析區:擴增片段的進一步分析測定,如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。

          試劑準備區、樣本制備區和擴增區內的實驗用品,包括移液器等器具應專用,空氣、物品流向依次為:試劑準備區、樣本制備區、擴增區、產物分析區,不可逆行。

          2、清潔的實驗用品:

          實驗室自配試劑(去離子水、緩沖液等)和所有使用器具在使用之前均應高壓滅菌或紫外殺菌。槍尖、反應管等實驗耗材應一次性使用。

          3、正確的實驗操作:

          實驗應在超凈工作臺內進行,工作臺內應放置PCR專用的微量離心機、各量程的移液器和其他物品。

          實驗的過程中選擇合適尺寸的手套并能及時更換,在進出不同實驗區域或進行模板操作后都應更換實驗服、口罩、帽子及手套,以避免不同實驗區交叉污染。


          PCR實驗室的防污染方法


          裝有PCR試劑的反應管在打開之前應先瞬時離心,將管壁及管蓋上的液體離至管底,降低污染手套或加樣器的風險;謹慎開啟反應管,防止管內液體濺出或形成氣溶膠導致污染。

          吸加試劑和模板的操作應嚴格按照規范要求進行,遵守“慢吸快打”原則,盡量一次性完成,忌多次抽吸,以避免氣溶膠產生的交叉污染。

          PCR試劑建議小量分裝,以減少反復凍融、重復取樣次數;多樣本PCR反應時,先配制反應混合液分裝至反應管中,然后加入樣本核酸,請勿同時開蓋,盡量保證單人單管,實現完全閉管操作。

          實驗試劑應與樣品和PCR產物分開保存,不應放于同處。

          PCR擴增實驗完成后及時將反應管取出,用一次性手套將產物反應管包裹丟棄,保證管蓋緊閉。

          4、規范的實驗設計:

          應遵循實驗室內部質量控制的相關規定,實驗中設立陽性對照、陰性對照和空白對照,全程質控實驗過程,驗證PCR反應的可靠性,并協助判斷擴增系統的可信性。

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